作者：医院邓芳常人亮李明

患者张某，男，35岁，我院血液科层流病房1床，体征：重症贫血貌，胸背部、双上肢可见密集分布红色斑丘疹，浅表淋巴结无肿大。年2月20日进入我院治疗，诊断为：重型再生障碍性贫血，合并肺部感染、蛛网膜下腔出血。3月1日送检血常规，Sysmexi全自动血细胞分析仪检测WBC16.91×10*9/L，PLT20×10*9/L，提示：难溶红细胞，WBC异常散点图。并在Sysmexi全自动血细胞分析仪重新检测，结果一致。当日值班医生查看该患者2月26日血常规历史记录发现：WBC0.18×10*9/L，PLT9×10*9/L，两者存在明显差异，随即打电话给该患者床位医生沟通，结果与临床不符。随后请示上级检验医师，推片进行瑞氏染色和革兰氏染色，发现疑似真菌孢子的形态，见下图。建议临床进行CRP和血培养检查，CRP结果为mg/L，血培养第二天即报警阳性，经鉴定为克柔假丝酵母菌。抗真菌感染治疗后，3月2日患者再次进行血常规检测，WBC0.17×10*9/L，PLT2×10*9/L。

图1：血涂片瑞氏染色图片

图2：血涂片革兰氏染色图片

图3：血培养革兰氏染色图片

真菌可以对细胞计数造成如此大的差异吗？检验科人员心怀疑虑，临检组负责人常人亮医生翻阅文献，发现曾有过真菌孢子影响尿液分析仪细胞计数的报道[2-3]。常医生立即想到：sysmex尿液分析仪和血液分析仪计数技术均建立在激光散射和核酸染色的基础上，是否对血液也有影响呢？为验证真菌孢子是否会导致白细胞假性增高，我科常人亮医生同微生物室阚劲松和陈兆武取真菌培养皿中菌落混入白细胞2.5×10*9/L血常规标本中，在sysmexi细胞分析仪上检测显示：70*10*9/L！仪器报警：难溶红细胞。

为进一步评估真菌孢子对该仪器白细胞检测系统偏差的影响，我科李明实施实验：选取临床常见的4种真菌孢子白色念珠菌、克柔假丝酵母菌、热带念珠菌和光滑念珠菌，采用0.9%的生理盐水配制成终浓度为4-6×10*9/L的真菌原液，与外周血全血（含高、中、低三个浓度的白细胞和血小板）按一定比例混合，制备成含不同浓度（4-6×10*8/L、4-6×10*7/L、4-6×10*6/L、4-6×10*5/L）真菌孢子的全血样本，Sysmex-i全自动血细胞分析仪上机检测，观察不同种类、不同浓度的真菌孢子对白细胞计数和血小板计数的影响以及散点图的变化情况。高浓度真菌孢子使全自动血细胞分析仪白细胞计数和血小板计数假性升高，其中以热带念珠菌和克柔假丝酵母菌对WBC计数影响较大，克柔假丝酵母菌对PLT计数影响最大。从实验证实了真菌孢子可能会对全自动血细胞分析仪细胞计数产生较大影响，临床日常工作中应加以重视。

临床上广谱抗生素和免疫抑制剂的广泛使用，特别是在肿瘤病房、层流病房、重症监护室，医院内真菌感染的发生率逐年递增，真菌孢子对血液分析仪的干扰,应该引起我们的高度重视。真菌浓度在10*7-10*8/L时，WBC计数发生明显变化，热带念珠菌和克柔假丝酵母菌对WBC计数影响更大。这可能与热带念珠菌和克柔假丝酵母菌孢子体积较大，而光滑念珠菌体积较小有关。而在PLT计数过程中，真菌浓度在10*8/L时，PLT计数发生明显变化，其中以克柔假丝酵母菌对PLT计数影响最大，而对WBC计数影响较小的光滑念珠菌对PLT计数发生明显变化。这与国外Latif等[4]报道一致，推测可能由于悬浮的光滑念珠菌孢子在散射光的照射下与血小板比较相似，被仪器误认为血小板的原因。对于克柔假丝酵母菌同时使WBC和PLT计数假性增高的原因，在改良牛鲍氏血细胞计数板计数真菌浓度时发现许多克柔假丝酵母菌孢子旁边有个小孢子，可能是克柔假丝酵母菌以出芽方式生长时产生的小孢子，推测可能芽生的小孢子影响了PLT计数。

当血液标本中真菌孢子浓度较低时，因为孢子体积较小，散点图落在淋巴细胞区。但是随着真菌孢子浓度增加，使得部分红细胞膜不能完全被裂解液破坏，导致仪器检测时误将未溶解的红细胞当作白细胞，结果导致白细胞的异常升高，并且导致其电阻抗、散射光及荧光信号发生不规则改变，致使仪器无法正常识别，从而不能正常分类。在血小板计数的过程中，由于某些真菌孢子（光滑念珠菌）的大小与血小板大小相似，仪器计数过程中把真菌孢子当作血小板进行计数，故使得PLT计数升高。

对于细菌等干扰仪器往往会给出白细胞分类异常、散点图异常、Q-flag图异常、提示难溶红细胞（此病例仪器也有此提示）、血小板分布异常等提示[5-6]，科室应以全国临床检验操作规程为依据，结合本院具体情况制定出“血常规复镜规则”，加强科室形态学基本技能，及时进行显微镜检查，保障血常规分析报告的准确性，为临床提供诊断依据或诊断线索。

参考文献

[1]田英,贺春娥,胡永芳,等.真菌血症导致白细胞计数假性增高1例.医院感染学杂志，，15

[2]曾素根,余江,曾婷婷，等.Sysmex公司血液分析仪的干扰因素分析判断及处理程序[J].检验医学,,25.

[3]KimHR,ParkBR,LeeMK.EffectsofbacteriaandyeastonWBCcountinginthreeautomatedhematologycounters.AnnHematol,,87.

[4]LatifS,VeillonDM,BrownD,etal.Spuriousautomatedplateletcount;enumerationofyeastformsasplateletsbytheCell-DYN[J].AmJClinPathol.;.

[5]丛玉隆.血细胞分析仪形态学分析技术与镜检筛选[J].中华检验医学杂志，,37.

[6]PratumvinitB,WongkrajangP,ReesukumalK,etal.Validationandoptimizationofcriteriaformanualsmearreviewfollowingautomatedbloodcellanalysisinalargeuniversityhospital[J].ArchPatholLabMed,,.